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关于羊水细胞性别鉴定科学研究实践
来源：admin 时间：2014-03-01 查看次数：
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从最初的胚胎性别的预测假想到后来成为现实,是由于性分化机制的逐步阐明,分子生物学，遗传学，荧光PCR技术，及DNA染色体等进一步发展。羊水细胞检测可应用于计划生育，和控制性连锁遗传疾病,包括唐氏综合症，意义重大。国内外的医学都对此做了详细的研究。★历史
羊膜穿刺术最早在1956年,Fuchs医学博士首先用在胎儿性别的判定上取得成功。在医学界，羊水细胞性别鉴定科学研究是90年代热门的研究领域，到今天已经有20多年，在外国是比较成熟的。羊膜穿刺术历悠久，应用在胎儿产前的性别测试也有2-30年历史。医学界主张经腹穿刺取得羊水是因为希望避免感染,它的过程是:穿刺针经腹壁→腹膜→子宫浆膜→子宫肌层→蜕膜→绒毛膜→羊膜→羊膜腔。
最好的手术时间是：妊娠14周后。
原因在于：由于羊水细胞主要来源于胎儿脱落上皮组织,才能比较可靠地反映胎儿实际情况。妊娠14周后母亲羊水量有3000CC以上，抽取20CC不会对胎儿造成不好影响，母体也能快速恢复。由于男女胎儿Y染色体的区别，因些，目前医学上认为羊水检测还是比较准确的，具有权威科学性。
★好处：
虽然我国禁止羊水穿刺等医学或非医学的胎儿性别鉴定(包括：各种性别鉴定药，B超，预测方法等)，由于人们对胎儿性别生男生女了解的需求存在，你在网上还是可以看到相关信息的)任何胎儿性别预测.在外国是可以存在的，公民也是拥有合法知情权的。
在国外看来，羊水鉴定性别不仅利于计划生育,还有助于某些遗传病的产前诊断(或称宫内诊断)。例如:血友病是由X染色体上隐性遗传基因控制的疾病,它与性别有关,因携带致病基因女性杂合体与正常男性婚配所产生的男孩可能一半发病,在预防这类疾病时,需要预测胎儿性别。
★研究实践:
1949年Barr氏等发现X染色质后,逐步为人们证实。人体细胞有46条染色体,其中44条为常染色体,2条为性染色体。女性的性染色体为xx,男性的性染色体为xy。x性染色质是来源于女性两个x中一个,具有明显固缩特征的x染色体。在间期核细胞,x染色体内的DNA链状结构保持螺旋化。羊水来源干细胞(amniotic fluid-derived stem cells,AFSCs)是倍受关注的新成体干细胞类型,有关羊水干细胞的分离培养、生物学特性分析、体内外分化潜能等仍有很多问题需深入探讨。
在羊水穿刺过程中,剖宫取胎或羊膜腔穿刺时,取羊水标本93份,进行测定,标本在800一900转速离心10分钟后,弃去上层清液,并加入固定液(3:1)，随后屏光技术,详细看下文。
研究1：对羊水细胞的AFSCs分离培养,及生物学特性分析.
抽取羊水10-20ml后进行离心，在4种不同的条件下进行培养，如下：
1,LD+20%胎牛血清
2,LD+10%胎牛血清+0.1%明胶铺板。
3,低糖DMEM培养基(LD)+10%胎牛血清(FBS)
4,LD+15%胎牛血清+4ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)
通过这样，比较不同培养条件下原代正常数，可传代次数,扩增细胞数等;在最好的技术支持下对羊水来源干细胞进行扩增,通过观察形态学,细胞周期和生长曲线,特异性标志物检测,体外诱导分化,染色体核型分析及致瘤实验等对其生物学特性进行系统分析。
结果:15%血清结合bFGF的条件下，可促进原代羊水细胞的贴壁生长和持续扩增,在此培养条件下AFSCs生长旺盛,持续传代;
另外，还有大部分间充质来源标志如CD105、CD44、CD29,以及部分全能干细胞标志如SSES-4、Oct-4和Nanog;它们经不同诱导分化条件培养后,从基因表达或表型上证实可向脂肪细胞、神经元及成骨细胞层的目的细胞分化;
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