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发现母血胎儿dna－开创dna性别鉴定
来源：admin 时间：2014-03-01 查看次数：
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dna染色体的研究开始于哺乳动物染色体的研究，在性别鉴定方面，通过蜜蜂和怀孕的牛胎儿，通过dna染色体准确鉴定出性别；从此，开始了人类dna染色体鉴定性别的研究和应用，至今，已有数十年；1998年，格里菲斯指出：dna性别鉴定基于可靠的野生个体在分子生态学和保护遗传学研究。 SRY基因位点技术通常用于哺乳动物性别检测,如，美国国家公园的黑猩猩维鲁斯,山地大猩猩(beringei),卢旺达-长臂猿,提取DNA使用实时定量PCR分析;由于存在高频率的amplifyingmicrosatellite位点等位基因,分析DNA包含25个pg,我们避免使用5% - 10% ofextracts包含少于5 pg的DNA / ul。 通过黑猩猩和大猩猩的粪便dnaPCR检测准确性在94%和97%;
1997年，罗等人首先描述母体血浆和血清中胎儿DNA的存在。无细胞DNA提供了一种新的无创性产前诊断胎儿遗传物质的来源。他们开发了一种实时定量PCR检测方法来测量的胎儿DNA的浓度，并分析SRY基因，分析Y染色体的特定的序列，量化每毫升血液中的基因组量数。结果表明，当怀孕孕妇进行dna性别鉴定时，在第一和第三孕期期的孕妇血浆中胎儿DNA和DNA的浓度分别为3.4%和6.2%。他们估计，在怀孕早期母体血浆样本中胎儿DNA浓度平均为25.4mg/ml。他们还证实，分娩后，无细胞的胎儿DNA被清零，非常迅速地进入母体循环。因此，相对高浓度的胎儿细胞dna染色体在母体血液中的游离DNA表明:简单易执行收集胎儿dna从母血中，开创了未来血液dna性别鉴定的条件。羊膜穿刺术疼吗？
参考血液和体液协议稍作修改，使用QIAamp血液试剂盒（QIAGEN）从1.5毫升的血浆样品提取DNA。用50μL的水列脱洗的DNA。在dna性别鉴定的检测中，收集母体血液样品10－12ml(含有EDTA),3小时内以通过离心分离3000克血液的试管；然后,等离子转入普通聚丙烯管，并再次分离离心3000 克血液。收集上清液装入新鲜管，并储存在-20℃低温下，直到进一步检测。
实时定量PCR检测
使用ABI PRISM 7700序列检测器（美国应用生物系统公司生产）,母体血浆DNA分析我们使用了罗氏诊断公司的LightCycler，这是一种可靠的方法，DNA定量分析分子标记的Y染色体特异性序列，DYS-14，检测男性胎儿量化胎儿细胞的游离DNA。DYS-14序列的PCR系统包括:扩增DYS14-713F（5'-CAT CCA GAG CGT CCC TGG-3'）和DYS14-880R（5'-TTC CCC TTT GTT CCC CAA A-3'）和双标记的荧光探针DYS14-883T（5'-FAM-CGA AGC CGA GCT GCC CAT CA-TAMRA-3'）结合应用。
PCR反应的荧光探针和使用试剂组获得的扩增引物，所提取的血浆DNA（13.1μL）被用作每个反应的模板。热循环开始在95℃下变性10分钟，接着在95℃下进行40个循环的变性10秒，在72℃下为20秒;在57℃变性20秒。通过与男性基因组DNA的校准稀释曲线比较,确定男性DNA中存在的血浆样品的数量的副本。用于转换的副本的数目为6.6皮克。扩增使用LightCycler软件dna数据进行了分析，并计算的DYS14序列的浓度。采取严格的预防措施，防止污染每个环节;
通过分析了302母体血浆的样品确实胎儿性别实验中;143怀孕男胎，159怀孕女胎儿。总的敏感性为98.2%，特异性为100%，阳性预测值为100%，阴性预测值是97.5%。
妊娠7至16周，胎儿DNA的平均浓度为37.5±32.1/ml。
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